副流感病毒通用探針?lè)晒舛縍T-PCR試劑盒

產(chǎn)品簡(jiǎn)介
副流感病毒通用探針?lè)晒舛縍T-PCR試劑盒艱難梭狀芽孢桿菌(Clostridium difficile)屬厭氧性細(xì)菌，一般寄生在人的腸道內(nèi)。

產(chǎn)品型號(hào)：

更新時(shí)間：2024-07-18

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

訪問(wèn)量：532

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副流感病毒通用探針?lè)晒舛縍T-PCR試劑盒

商品名稱：副流感病毒通用探針?lè)晒舛縍T-PCR試劑盒

副流感病毒是常常引起兒童下呼吸道感染的一種病毒，其致病性僅次于呼吸道合胞病毒 (RSV)。與RSV一樣，人類副流感病毒可以造成反復(fù)發(fā)作的上呼吸道感染（如感冒和喉嚨痛）。它也能造成嚴(yán)重的反復(fù)感染的下呼吸道疾病（如肺炎，支氣管炎和細(xì)支氣管炎），特別是在老年人中和有免疫缺陷人群中。因此快速靈敏診斷具有重要意義。本產(chǎn)品就是以探針?lè)晒舛?RT-PCR 技術(shù)為基礎(chǔ)開(kāi)發(fā)的專門(mén)檢測(cè)副流感病毒的試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開(kāi)即用，用戶只需要提供樣品 RNA 模板。

2. 引物和探針經(jīng)過(guò)優(yōu)化，靈敏性高。

3. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 特異性高，引物是根據(jù)副流感病毒高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，不會(huì)跟其他病毒的 RNA 發(fā)生交叉反應(yīng)。

5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針?lè)晒舛?RT-PCR 反應(yīng)。

6. 本產(chǎn)品只能用于科研。

【試劑組成】

成分	包裝
2×Probe qPCR MagicMix	500μL（本色蓋）
熒光 PCR 專用模板稀釋液	1 mL（黃蓋）
副流感病毒通用探針?lè)?qRT-PCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
副流感病毒通用 qRT-PCR 探針	50 μL（棕色管）
副流感病毒通用探針?lè)?qRT-PCR 陽(yáng)性對(duì)照(1×10E8 拷貝/μL)	50 μL（黃蓋）
核酸釋釋劑（試用裝）	20 次（1mL,綠蓋）
使用手冊(cè)	1 份

【儲(chǔ)存條件及有效期】

低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為 12 個(gè)月。

【自備試劑】樣品 DNA。

【使用方法】

一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。

1. 由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供無(wú)傳染性的 DNA 片段作為陽(yáng)性對(duì)照1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。

2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 RT-PCR 專用模板稀釋液，最好用帶芯槍頭，下同）。

在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(試劑盒提供)，充分震

蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

4. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

5. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品 RNA 的制備

7. 如果有 N 個(gè)樣品，最好設(shè)置 N+2 個(gè)提取，多出的一個(gè)是 PC（樣品制備陽(yáng)性

對(duì)照），一個(gè)是 NC（樣品制備陰性對(duì)照）。可以用 10μL 陽(yáng)性對(duì)照的 10000倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為 NC。

8. 用自選方法純化樣品的 RNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒 RNA 提取試劑盒兼容。也可以選購(gòu)本公司的柱式病毒 RNAout。本試劑盒免費(fèi)贈(zèng)送 20 次免 RNA 提取的核酸釋放劑試用裝，該釋放劑的裂解液可以直接作為RT-PCR 模板，省略了 RNA 提取步驟。其使用手冊(cè)可向本公司客服索取。

三、Probe qRT-PCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）

9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），1 個(gè)用于 PCR 陽(yáng)性對(duì)照（用第 4 號(hào)管的陽(yáng)性對(duì)照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。

10. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)

置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照，并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后最后加）：

成分	樣品管N+2 個(gè)	RT-PCR 陰性對(duì)照管	標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品管（2-7 管）
2×Probe qPCR MagicMix	各 10 μL	10 μL	各 10 μL
副流感病毒通用 qRT-PCR 探針	各 1 μL	1 μL	各 2 μL
副流感病毒通用探針?lè)?span>qRT-PCR 引物混合液	各 2 μL	2 μL	各 2 μL

待測(cè)樣品 RNA 模板

各 6 μL

超純水

6 μL

第 7 步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品稀釋液

（2-7 號(hào)）

各 6μL（2 號(hào)樣到 2 號(hào)管，3

號(hào)樣到 3 號(hào)

管…）

11. 蓋上蓋子后上機(jī)，按下面參數(shù)進(jìn)行 RT-PCR：

過(guò)程	溫度	時(shí)間
逆轉(zhuǎn)錄	50℃	30 min
預(yù)變性	95℃	10 min
RT-PCR 反應(yīng) （40 個(gè)循環(huán)）	95℃	15 sec
RT-PCR 反應(yīng) （40 個(gè)循環(huán)）	60℃	1 min（采集 FAM 通道的熒光信號(hào)）

五、數(shù)據(jù)處理

12. 如果把本試劑盒用于定量檢測(cè)，則以陽(yáng)性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品RNA 濃度的 log 值，再推算出其濃度。

13. 如果把本試劑盒用于定性檢測(cè)，只判斷陽(yáng)性或陰性，則陰性對(duì)照 Ct 必須大于或等于 40。陽(yáng)性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長(zhǎng)，有典型擴(kuò)增曲線，Ct 值應(yīng)該小于或等于 30。對(duì)待測(cè)樣品，如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性，如果小于或等于 35 則為陽(yáng)性。如果在 35-40 之間，則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的 Ct值如果大于或等于 40 則為陰性，如果小于 40，則為陽(yáng)性。