牛結(jié)節(jié)性皮膚病間接ELISA抗體檢測(cè)試劑盒

僅供科研

牛結(jié)節(jié)性皮膚病（Lumpy skin disease，LSD）是由牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒（Lumpy skin disease virus，LSDV）引起的一種急性或亞急性傳染病，使病畜全身被結(jié)節(jié)覆蓋，甚至引發(fā)死亡。其暴發(fā)會(huì)對(duì)牛養(yǎng)殖國(guó)家造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。因此，快速檢測(cè)出感染牛，對(duì)于預(yù)防病毒擴(kuò)散和控制疾病傳播至關(guān)重要。

【檢測(cè)原理】

在反應(yīng)板微孔中包被牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒特異性抗原，待檢血清中的特異性抗體與包被抗原特異性結(jié)合，形成抗原抗體復(fù)合物。加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的抗牛 IgG 抗體，與微孔中的抗原抗體復(fù)合物結(jié)合。加入 TMB 顯色底物后，微孔中結(jié)合的 HRP 催化底物反應(yīng)呈藍(lán)色。顏色反應(yīng)的深淺與樣品中存在的抗牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒特異性抗體的量成正比。

【試劑盒組成】

【儲(chǔ)存條件及有效期】

本試劑盒的儲(chǔ)存溫度為 2-8°C 。有效期 12 個(gè)月。

【自備實(shí)驗(yàn)材料】

微量可調(diào)移液器及配套槍頭 恒溫培養(yǎng)箱、計(jì)時(shí)器、記號(hào)筆

酶標(biāo)儀（含波長(zhǎng) 450nm 的濾光片） 去離子水或蒸餾水

洗板機(jī)（可選）

【試劑以及樣品制備】

洗液 1×：使用前，濃縮洗液應(yīng)恢復(fù)至室溫（20～25℃），并搖動(dòng)，使沉淀溶解（最好在 37℃恒溫培養(yǎng)箱中加熱 5～10 min）， 然后用蒸餾水作 10 倍稀釋（例如：60 mL 的濃縮洗滌液加上 540 mL蒸餾水）混勻，稀釋好的洗液 2～8℃可存放 7 日。

【操作步驟】

1.   準(zhǔn)備：所有試劑在使用前應(yīng)先恢復(fù)至 15～25℃，通過(guò)渦旋振蕩器輕振所有試劑混勻；

2.   取出密封的抗原包被板，沿包裝袋切口處撕開，記錄樣品位置；

3.   待檢樣品稀釋：將待檢樣品用樣品稀釋液按 1:50 倍稀釋（196

µL 樣品稀釋液中加 4 µL 待檢血清樣品），陰陽(yáng)性對(duì)照不用稀釋；

4.   在 ELISA 包被板上：加入稀釋好的樣品，100µL/孔，陽(yáng)性對(duì)照血清加 2 孔，100µL/孔；陰性對(duì)照血清加 2 孔，100µL/孔； 貼上封板膜；

5.   置 37℃恒溫箱中避光孵育 30 min；

6.   小心取掉封板膜，棄去孔中液體。每孔加約 300μL 洗液 1×， 靜置 1min 后，棄去洗滌液。洗滌 4 次，最后一次拍干。洗板間隔應(yīng)避免微孔干燥后在吸水紙上拍干；

7.   在所有孔內(nèi)加入 100μL 的酶結(jié)合物工作液；

8.   置 37℃恒溫箱中避光孵育 30 min；

9.   小心取掉封板膜，棄去孔中液體。洗滌 4 次，方法同 6；

10.  將底物 A 液與底物 B 液按 1:1 混合，加入孔中，100 µL/ 孔， 貼上封板膜；

11.  置 37℃恒溫箱中避光孵育 10 min；

12.  每孔加入 50μL 終止液，振蕩混勻，5min 內(nèi)在酶標(biāo)儀 450nm 讀數(shù)。

【注意事項(xiàng)】

1.        所有實(shí)驗(yàn)過(guò)程應(yīng)遵守農(nóng)業(yè)農(nóng)村部關(guān)于牛結(jié)節(jié)性皮膚病檢測(cè)相關(guān)的規(guī)定。

2.       牛結(jié)節(jié)性皮膚病間接ELISA抗體檢測(cè)試劑盒僅用于體外診斷使用，應(yīng)2～8℃冷藏運(yùn)輸。

3.        所有的試劑在使用前應(yīng)先恢復(fù)至18～25℃，用渦旋振蕩器振蕩混勻。

4.        濃縮洗液10×在低溫條件下會(huì)產(chǎn)生結(jié)晶，使用前要溫育使其溶解。

5.        注意防止試劑盒成分的污染，不同批次試劑盒成分不要混用， 不要使用超過(guò)有效期的試劑，未用完的反應(yīng)板條應(yīng)加干燥劑密封，連同未使用完試劑放回2～8℃保存。

6.        待檢血清數(shù)量較多時(shí)，應(yīng)先稀釋完所有待檢血清，再加到反應(yīng)板上， 使反應(yīng)時(shí)間一致。

7.        底物 A 液和底物 B 液對(duì)強(qiáng)光和氧化劑敏感，應(yīng)避光保存，防止氧化劑污染，對(duì)皮膚有刺激性。

8.        樣品稀釋液、對(duì)照血清與酶標(biāo)抗體中含有微量防腐劑，應(yīng)防止與皮膚接觸。

9.        試驗(yàn)廢料、廢水等應(yīng)做無(wú)害化處理，以免污染環(huán)境。

10.     嚴(yán)格遵守這些條款可以獲得理想的結(jié)果，特別是液體用量、作用時(shí)間和溫度必須準(zhǔn)確。