轉(zhuǎn)基因大豆品系MON87751核酸檢測(cè)試劑盒

【產(chǎn)品名稱(chēng)】

通用名稱(chēng)：轉(zhuǎn)基因大豆品系MON87751核酸檢測(cè)試劑盒

Name：Transgenic soybean MON87751 line fluorescent PCR kit

【包裝規(guī)格】48T/盒

【產(chǎn)品說(shuō)明】

轉(zhuǎn)基因檢測(cè)系列產(chǎn)品可針對(duì)食品、飼料等樣品中轉(zhuǎn)基因成分的特異核酸片段進(jìn)行擴(kuò)增，通過(guò)實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線(xiàn)判定結(jié)果。本產(chǎn)品用于轉(zhuǎn)基因大豆品系 MON87751 成分的檢測(cè)，檢出限為 0.01%。

【產(chǎn)品組成】

【適應(yīng)儀器】

ABI 7500、CFX 96、Mx 3005P、LineGene9600 等實(shí)時(shí)熒光 PCR 儀。

【自備耗材和儀器】

①冰盒；②移液器（0.5-10 μL，10-100 μL，100-1000 μL）及配套滅菌吸頭；③滅菌 0.2 mL PCR 管或八聯(lián)管；

④離心機(jī)；⑤渦旋混勻器；⑥金屬浴；⑦均質(zhì)機(jī)、攪拌機(jī)或研缽等研磨器具；⑧電子天平。

【 注意事項(xiàng)】

1.      本試劑檢測(cè)靈敏度高。為了防止污染，實(shí)驗(yàn)要分區(qū)操作。

1） 第一區(qū)：試劑準(zhǔn)備區(qū)。

2） 第二區(qū)：樣本制備區(qū)。

3） 第三區(qū)：擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)。

★ 分區(qū)之間最好進(jìn)行物理性隔離，避免人為因素造成的污染。

2.      實(shí)驗(yàn)過(guò)程中穿戴工作服和乳膠手套，不同區(qū)域獨(dú)立使用工具，需更換手套和實(shí)驗(yàn)服。

3.      嚴(yán)格按照操作步驟操作，試劑配制和加樣等步驟請(qǐng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)要求在冰盒上操作。

4.      反應(yīng)液中的成分對(duì)光敏感，應(yīng)避光保存。試劑使用前要wan全解凍，但應(yīng)避免反復(fù)凍融，推薦使用前離心 30

秒，并按檢測(cè)頻次將反應(yīng)液以適當(dāng)體積分管保存。

5.      反應(yīng)結(jié)束后，擴(kuò)增管請(qǐng)置于密封袋內(nèi)丟棄，當(dāng)日清理，開(kāi)蓋易造成氣溶膠污染，禁止開(kāi)蓋。

6.      不同批號(hào)試劑請(qǐng)勿混合使用，在有效期內(nèi)使用。

【樣品處理】

參照《GB/T 19495.3-2004 轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè) 核酸提取純化方法》或其他標(biāo)準(zhǔn)處理樣品，除了處于食物和（或） 飼料鏈起始端的農(nóng)產(chǎn)品和粗加工材料（如粉碎的產(chǎn)品），大多數(shù)工業(yè)加工的食品經(jīng)過(guò)了物理、化學(xué)及酶的處理。這些處理會(huì)降低 DNA 的含量及純度。因此，每一方法的適用性及重復(fù)性會(huì)隨特異樣品而異，一種特定的 DNA/提取方法的性質(zhì)特征依賴(lài)于被研究的食品種類(lèi)。實(shí)驗(yàn)室樣品的代表性應(yīng)符合《GB/T 19495.7-2004 轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)抽樣和制樣方法》。制備的樣本保存待用。

★ 若使用非一次性研磨器研磨樣品，一定要che底清洗研磨器并充分干燥后再進(jìn)行下一份樣品的研磨，防止交叉污染。

【實(shí)驗(yàn)操作】

1.    試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)，放置于冰盒中進(jìn)行）：

若有 N 個(gè)待檢樣品，則參照下表，按照 N+2 個(gè)數(shù)量計(jì)算反應(yīng)液用量（N 個(gè)待檢樣品+1 個(gè)空白對(duì)照+1 個(gè)陽(yáng)性照），渦旋混勻，離心 30 秒，分裝于 0.2 mL PCR 管中。

2.      模板制備（樣本制備區(qū)）

建議使用配套植物基因組 DNA/提取試劑盒，具體過(guò)程詳見(jiàn)產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。

3.      添加模板（樣本制備區(qū)，放置于冰盒上進(jìn)行）

在步驟 1 中已含有反應(yīng)液的 PCR 管中加入 5 μL 模板，順序?yàn)?NG-P、待測(cè)樣品模板、PG-MON87751-P。渦旋混勻，離心 30 秒，立即進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增反應(yīng)。

4.      擴(kuò)增反應(yīng)（擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)）

使用熒光定量 PCR 儀，熒光基團(tuán)選擇 FAM，淬滅基團(tuán)選擇 NONE。按下列條件設(shè)置擴(kuò)增反應(yīng)：

5.      基線(xiàn)和閾值設(shè)定

基線(xiàn)調(diào)整取 3-15 個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)，閾值線(xiàn)應(yīng)超過(guò)空白對(duì)照擴(kuò)增曲線(xiàn)的最高點(diǎn)。

【結(jié)果判定】

測(cè)試樣品檢測(cè) Ct 值≥40，曲線(xiàn)為直線(xiàn)或輕微斜線(xiàn)，無(wú)“S"型擴(kuò)增曲線(xiàn)，可判定樣品不含有 MON87751 品系或含量低于檢出限；

測(cè)試樣品檢測(cè) Ct 值≤36，曲線(xiàn)呈“S"型擴(kuò)增曲線(xiàn)，可判定樣品含有 MON87751 品系；

測(cè)試樣品檢測(cè) Ct 值在 36～40 之間，應(yīng)調(diào)整模板濃度，重做實(shí)時(shí)熒光 PCR。再次擴(kuò)增后的樣品檢測(cè) Ct 值＜40， 則可判定樣品含有 MON87751 品系；再次擴(kuò)增后的樣品檢測(cè) Ct 值≥40，則可判定該樣品不含有 MON87751 品系或含量低于檢出限。

★NG 反應(yīng)為平滑直線(xiàn)，PG 反應(yīng)為“S"型擴(kuò)增曲線(xiàn)，此次檢測(cè)結(jié)果有效，否則無(wú)效。如重復(fù)檢測(cè)結(jié)果仍為無(wú)效，請(qǐng)與技術(shù)支持人員聯(lián)系。