土壤總磷/有機(jī)磷/無(wú)機(jī)磷含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)

                                           微量法 100T/96S

注   意 ：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義：                           

土壤總磷包括有機(jī)磷和無(wú)機(jī)磷，其中無(wú)機(jī)磷能夠直接被植物利用。土壤有機(jī)磷經(jīng)過(guò)礦化分解而轉(zhuǎn)化為無(wú)機(jī)磷。同時(shí)測(cè)定土壤總磷、有機(jī)磷和無(wú)機(jī)磷，可以全面反映土壤磷營(yíng)養(yǎng)狀況。

測(cè)定原理：

利用鉬藍(lán)法定磷。取一份土樣，通過(guò)浸提法測(cè)定土壤無(wú)機(jī)磷含量；另外取一份土樣，經(jīng)高溫灼燒后，土壤有機(jī)磷轉(zhuǎn)化為無(wú)機(jī)磷，測(cè)得土壤總磷含量；總磷含量減去無(wú)機(jī)磷含量，即可計(jì)算出有機(jī)磷含量。

自備儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式水浴鍋，分析天平、可調(diào)式移液器、550℃高溫電爐、蒸餾水、100目篩子（可更小）。

試劑組成和配制：

試劑一：液體×1瓶，4℃保存。臨用前用蒸餾水稀釋10倍后再用。

試劑二：液體×1瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前配制，加入8mL蒸餾水，充分溶解后加入4mL試劑二，混勻。

標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1支，20 μmol/L無(wú)機(jī)磷標(biāo)準(zhǔn)品，4℃保存。

土壤不同形態(tài)磷提取：

1.無(wú)機(jī)磷：稱取通過(guò)100目篩子的風(fēng)干土樣0.01g，轉(zhuǎn)移到1mL離心管，加入1mL試劑一，震蕩混勻，然后置于45℃水浴1h，8000g，25℃離心10min，取上清液一，用于無(wú)機(jī)磷含量測(cè)定。

2.總磷提取：取通過(guò)100目篩子的風(fēng)干土樣，550℃灼燒1h，冷卻后稱取約0.01g，轉(zhuǎn)移到1 mL離心管，加入1mL試劑一，震蕩混勻，然后置于45℃水浴1h，8000g，25℃離心10min，取上清液二，用于總磷含量測(cè)定。

測(cè)定步驟：

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到660 nm，蒸餾水調(diào)零。

2.打開(kāi)水浴鍋，調(diào)節(jié)溫度到40℃。

3. 空白管：取EP管，依次加入100μL蒸餾水，100μL試劑三，混勻后置于40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10 min后于660 nm測(cè)定吸光度，記為A空白管。

4. 標(biāo)準(zhǔn)管：取EP管，依次加入10μL標(biāo)準(zhǔn)液，90μL蒸餾水，100μL試劑三，混勻后置于40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10 min后于660 nm測(cè)定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。

5. 測(cè)定管：取EP管，依次加入10μL上清液一或者上清液二，90μL蒸餾水，100μL試劑三，混勻后置于40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10 min后于660 nm測(cè)定吸光度，記為A測(cè)定管。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。

土壤磷含量計(jì)算：

a.使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

1.土壤無(wú)機(jī)磷含量（μmol /g 干重）=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定－A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)－A空白)]×V總÷W

                          =0.02×(A測(cè)定－A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)－A空白)÷W

C標(biāo)準(zhǔn)液：20 μmol/L； W：土壤樣品質(zhì)量，g； V總：上清液一總體積，1 mL=0.001 L。

2.土壤總磷含量（μmol /g 干重）=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定－A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)－A空白)]×V總÷W

                        =0.02×(A測(cè)定－A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)－A空白)÷W

C標(biāo)準(zhǔn)液：20 μmol/L；W：土壤樣品質(zhì)量，g；V總：上清液二總體積，1mL=0.001 L。

3.土壤有機(jī)磷（μmol /g干重）=土壤總磷-土壤無(wú)機(jī)磷

4. 

b. 使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

1.土壤無(wú)機(jī)磷含量（μmol /g 干重）=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定－A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)－A空白)]×V總÷W

                          =0.02×(A測(cè)定－A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)－A空白)÷W

C標(biāo)準(zhǔn)液：20 μmol/L； W：土壤樣品質(zhì)量，g； V總：上清液一總體積，1 mL=0.001 L。2. 土壤總磷含量（μmol /g 干重）=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定－A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)－A空白)]×V總÷W

                        =0.02×(A測(cè)定－A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)－A空白)÷W

C標(biāo)準(zhǔn)液：20 μmol/L；W：土壤樣品質(zhì)量，g；V總：上清液二總體積，1mL=0.001 L。

3．土壤有機(jī)磷（μmol /g 干重）=土壤總磷-土壤無(wú)機(jī)磷

注意事項(xiàng)：

試劑三配制過(guò)程中，可能會(huì)產(chǎn)生黑色固體，其不影響結(jié)果，注意吸取時(shí)不要將黑色固體吸入。