蔗糖（sucrose）含量試劑盒說明書

微量法100管/96樣

注   意 ：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義：

蔗糖是植物光合作用的主要產(chǎn)物，也是糖分運(yùn)輸和儲(chǔ)藏的主要形式。因此，測(cè)定蔗糖含量對(duì)于植物糖代謝具有重要意義。此外，蔗糖含量是飲料﹑蜂蜜、果脯﹑糖果和乳制品等產(chǎn)品質(zhì)量控制的重要指標(biāo)之一。

測(cè)定原理：

先用堿與樣品共熱，破壞其中的還原糖。然后在酸性條件下將蔗糖水解生成葡萄糖和果糖，果糖進(jìn)一步與間苯二酚反應(yīng)，生成有色物質(zhì)，在480nm下有特征吸收峰。

所需的儀器和用品：

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：液體 100ml×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體10mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：液體2ml×1瓶，4℃保存；

試劑三：液體 20ml×1瓶，4℃保存；

試劑四：液體 6ml×1瓶，4℃避光保存；

試劑五：粉劑0.5g×1瓶，常溫保存。

蔗糖提取：

稱取0.1~0.2g樣本，常溫研碎，加入0.5mL提取液，適當(dāng)研磨后快速轉(zhuǎn)移到離心管中，置于80℃水浴鍋中10min，振蕩3~5次，冷卻后，4000g，常溫離心10min，取上清，加入2mg試劑五，80℃脫色30min，再加入0.5mL提取液，冷卻后，4000g，常溫離心10min，取上清液測(cè)定。

測(cè)定步驟：

1、   分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至480nm，蒸餾水調(diào)零。

2、  樣本測(cè)定，（在EP管中依次加入下列試劑）：

   混勻，沸水浴煮沸5min左右（蓋緊，防止水分散失）

混勻，沸水浴30min，冷卻后取200μL至微量石英比色皿或96孔板中測(cè)定480nm處光吸收值，空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和測(cè)定管分別記為A1、A2和A3。空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只要做一管。

蔗糖含量計(jì)算：

1、按照蛋白質(zhì)含量計(jì)算

蔗糖含量(mg/mg prot)=(C標(biāo)準(zhǔn)管×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1) ÷（V1×Cpr）= (A3-A1)÷(A2-A1) ÷Cpr

此法需要自行測(cè)定蛋白濃度。

2、按照樣品質(zhì)量計(jì)算

蔗糖含量(mg/g鮮重)=(C標(biāo)準(zhǔn)管×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)=(A3-A1)÷(A2-A1)÷W。

C標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，1mg/mL；V1：加入樣本體積，0.025mL；V2：加入提取液體積，1mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g。

注意：Z低檢測(cè)限為100ng/g鮮重或1ng/mg prot